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分享实验分析检测中关于标准曲线

发布时间:2019-09-18 点击数:1142

  分析检测中的标准曲线是指一系列已知含量(浓度/量)的物质与仪器响应/信号之间的关系,数学处理就是曲线方程,图形表示就是标准曲线。标准曲线的目的是可以根据标准曲线查出待测物质的含量。当我们得到一系列已知含量的物质的响应后,就会去建立函数关系,数学上称曲线拟合,由于直线最为简单,所以常常用直线方程加以拟合,当然会用到多项式拟合等其他方式。

 

  标准曲线的核心

 

  1.能找到确切浓度的标准物质或标准品;

 

  2.标准系列和待测物质一定要有相同和一致的基体,因为样品基体可能会干扰仪器的响应,从这个意义上讲,样品的前处理实际就是提供标准和样品同样的基体环境,尽量祛除干扰基体。所以最好的标准系列应该是样品基体匹配的标准系列。而方法建立过程中首先要考虑的当然是基体干扰的问题,用标准加入曲线和Youden曲线分别考察样品基体所带来的乘积性干扰和加和性干扰。标准加入曲线就是在样品中加入一系列标准,然后考察该标准加入曲线和标准曲线斜率的统计学差异,若有差异需考虑用标准加入法定量;而Youden曲线就是对样品做一系列稀释,然后用稀释倍数如1/10、1/5、1/2、1对仪器响应做曲线,考察该Youden曲线的截距与0的差别,若有差别则提示有加和性干扰,此时测定值要减去该截距才是真实值。只有解决了标准曲线与样品基体的匹配问题,我们的定量才可靠。

 

  标准曲线的做法

 

  1.标准曲线的浓度范围应覆盖正常操作条件下的被测量范围;

 

  2.标准样品的组分尽量与被测样品组分一致;

 

  3.标准样品的浓度值应等距离的分布在被测量范围;

 

  4.标准样品的个数至少应有3个浓度;

 

  5.每个标准点至少重复2次,这个重复是指从稀释开始。

 

  

 

 

 

  标准曲线的检验

 

  标准曲线的检验,分为:精密度检验,截距检验和斜率检验,标准曲线的精密度检验,实际含义就是做出来的试验点在我拟合的直线方程左右的分布情况,标准曲线是所有点以最小二乘算法(OLS)拟合出来的,这条曲线到所有点的垂直距离的和(残差)是最小的。

 

  因此,这条曲线并非通过所有点而是非常接近所有点,精密度检验就是看这些试验点距离拟合的直线的距离有无异常,所以也称线性检验(拟合检验)。这时的精密度(线性检验)需用F检验,P<0.05作为线性检验合格的标准。

 

  标准曲线的截距检验和斜率检验分别考察Y=a+bX中a和b与0的统计学差异,a与0有差别说明有试剂空白或系统误差,而b若与0没差别说明仪器的灵敏度根本达不到分析要求。

 

  决定系数是相关系数的平方,就是我们经常在仪器软件中看到的R2或Fit,它提示的是我建立的回归方程所解释X对Y变化占Y变量的比值,比如决定系数是0.99也就是说我这个回归方程可以解释Y变化的99%,剩下的1%就是残差。前面提到的精密度(线性检验)就是用这两部分的变化做F检验,由于统计检验的临界值比较大,通常0.90以上的相关系数都会通过这个F检验,当然还与实验点数(自由度)有关。

 

  除此之外,最后我们还要看看这些残差的分布是否是正态的,因为,正态才符合随机误差的特性。

 

  综上所述,标准曲线的检验应该是线性检验结合失拟检验,以及残差的正态性检验结合才是统计学上比较完备的。